Кирпич кирпичом: Ассамблея вируса кори: Основные моменты продвинули криоэлектронные методы

Результаты были изданы понедельник, 30 апреля по своей природе Коммуникации.Ученые во главе с Элизабет Райт, доктором философии, и Цзунлун Кэ, доктором философии, говорят, что они могут различить внутренний матричный белок, действующий как леса с encapsidated генетическим материалом, видимым как «змеи» близко к вирусной мембране.

Эффективная вакцина доступна против вируса кори, высокоинфекционного вирусного болезнетворного микроорганизма. Все же есть все еще много о вирусных ученых, не понимают, говорит Кэ. Кроме того, понимание внутренней организации вируса кори могло вести изучение связанных вирусов, таких как парагрипп и дыхательный syncytial вирус (RSV), частые причины дыхательных болезней, и вирус Nipah, вдохновение для фильма Инфекция.

Мастер – адъюнкт-профессор педиатрии в Медицинской школе Университета Эмори и Детского Здравоохранения Атланты, директора Роберта П. Апкэриэна Интегрированное Электронное Ядро Микроскопии и Союз Исследования Джорджии Выдающийся Следователь. Кэ – бывший аспирант Технологического института Джорджии, который начинает постдокторское положение этим летом в Лаборатории MRC Молекулярной биологии в Кембридже, Великобритания.

Кэ и научный сотрудник Эмори Джошуа Штраус, доктор философии – co-first авторы статьи.Райт, Кэ и коллеги решили исследовать вирусные инфицированные клетки непосредственно пара несколько лет назад после работы с очищенными вирусами в течение долгого времени. Команда сотрудничала с Ричардом Племпером, доктором философии, который специализируется на вирусе кори и является теперь в Университете штата Джорджия. Семейство вирусов, которое включает корь, парамиксовирусы, трудное работать с, из-за их низких титров, нестабильности и разнородности, говорит Райт.

Для структурных исследований исследователи обычно концентрируют и очищают вирусы, центрифугируя их через толстые решения. Но это коварно для вируса кори и других окутанных вирусов, таких как RSV. Кэ уподобляет очищенный вирус ведру водных воздушных шаров различных размеров, которые мягки и подвержены разражающемуся, расстраивающие усилия визуализировать их.

«Вместо этого мы выращиваем и заражаем клетки непосредственно на сетках, которые мы используем для микроскопии, и быстро замораживаем их, прямо на стадии, когда они формируют новые вирусы», говорит Кэ.Улучшения технологии, такие как прямые электронные датчики и программное обеспечение, которое исправляет для вызванного лучом движения в замороженном образце, позволяют достигнуть более высокой резолюции КРИОИХ структуры. Криоэлектронная томография (крио-ET), идеал для изучения вирусов, которые приезжают в различные формы и размеры, использует электронный микроскоп, чтобы получить ряд 2D картин вирусов, поскольку типовой держатель наклонен к многократным углам вдоль одной оси.

Изображения и угловая информация тогда используются, чтобы вычислить 3D объем вируса, во многом как медицинская компьютерная томография, говорит Райт.«Мы никогда не видели бы этот уровень детали с очищенным вирусом, потому что процесс очистки разрушает и повреждает тонкие вирусные частицы», говорит она. «С подходом томографии целой клетки мы можем собрать данные по сотням вирусов во время этапов собрания и, когда выпущено. Это позволяет нам захватывать полный спектр структур вдоль вирусного пути собрания».

Например, ученые могут теперь видеть организацию гликопротеинов на поверхности вирусной мембраны. Предыдущая работа показала, что два гликопротеина присутствовали на мембране, но они были «лесом деревьев», где была недостаточная деталь, чтобы определить каждого.

В этом исследовании команда смогла решить эти два гликопротеина и решить, что один из них, сплав (F) белок, был организован в четко определенную решетку, поддержанную взаимодействиями с матричным белком. Кроме того, они видят «парапрозрачные множества» матричного белка, названного M, под мембраной.

Множества не были замечены в вирусных инфицированных клетках кори или отдельных вирусных частицах кори прежде, говорит Райт. Под микроскопом эти множества немного походят на пластины сетки Lego, от которых остальная часть вируса построена и заказана.

Новые 3D структуры также приводят доводы против предыдущей модели вирусного собрания, у которого был RNP (рибонуклеопротеин) генетический материал как ядро и белок M, формирующий пальто вокруг этого.Ученые все еще выясняют то, что заставляет вирус кори иметь выпуклую форму, в то время как RSV более волокнистый.

Кэ думает, что роль лесов M подобна для связанных вирусов, хотя, поскольку вирус собирается, отдельные структурные белки могут скоординировать исключительно, чтобы произвести вирусные частицы с различными формами, которые лучше поддерживают их цикл повторения.


Блог обо всем